La varietat d'infeccions bacterianes requereix una identificació clara del patogen i la definició de la seva espècie. Per determinar el tipus de microorganisme, els microbiòlegs es veuen ajudats per les seves propietats tinctorials: la susceptibilitat del microbi a tacar-se amb diversos colorants. Aquest mètode permet explorar la morfologia del patogen. Les propietats tinctorials dels bacteris són de gran importància per a la investigació pràctica i teòrica en el camp de la microbiologia.
Investigació microbiana
En bacteriologia, hi ha molts mètodes per tenyir microorganismes. Tots ells es basen en les propietats tinctorials dels bacteris. La tinció us permet determinar la seva forma, estructura, mida i posició relativa. Això permet resoldre els problemes de sistematització dels tipus de microorganismes de biologia general i microbiologia comparada.
Per què pintar-los
Els bacteris són pràcticamentorganismes transparents, i sense l'ús de tinció, són poc visibles per a la microscòpia convencional. Podeu utilitzar tipus especials de microscòpia (contrast de fase, camp fosc) per estudiar objectes, però la manera més senzilla és tenyir, després d'això, els bacteris es fan visibles en un microscopi de llum convencional.
Preparació de la mostra
Independentment de la tècnica de tinció utilitzada, hi ha regles uniformes per preparar l'objecte en estudi. Les etapes següents són obligatòries:
- Els instruments estèrils fan un frotis sobre un portaobjectes de vidre.
- La mostra s'està assecant. Això es fa a temperatura ambient o amb armaris d'assecat.
- Seguit de l'etapa de fixació: els microorganismes s'uneixen al vidre amb compostos especials.
- Tinció adequada: la mostra es cobreix amb colorant durant un període de temps determinat, després del qual es renta.
- Assecat final: la mostra es torna a assecar.
Els tints més comuns
Els colorants més utilitzats es basen en anilina amb diferents valors d'àcid (pH). La majoria dels colorants són pols que es dilueixen en alcohol.
Els colorants en què els cations són els colorants s'anomenen bàsics (pH superior a 7). Es poden utilitzar per tenyir microorganismes de colors vermell (magenta, safranina), violeta (violeta de metil, tionina), blau (blau de metilè), verd (verd malaquita), marró (crisoidina) i negre (indulina).
Els colorants, en els quals els agents colorants són anions, s'anomenen àcids (pH inferior a 7). Tindran la mostra de vermell (eosina), groc (picrina) o negre (nigrosina).
Hi ha un grup de colorants neutres (per exemple, la rodamina B), on tant cations com anions actuen com a colorants.
Cultura viva o morta
Els mètodes de tinció es divideixen en dos grups segons la forma de vida de la mostra de prova.
- Tinció vital (de tota la vida). Aquest mètode d'estudi de les propietats dels microorganismes s'utilitza en l'estudi dels teixits vius, cosa que permet observar els processos vitals dels microbis. Per a aquesta tinció, s'utilitzen colorants amb baixa toxicitat i alt poder de penetració.
- Tinció postvital. Aquesta és la tinció de microorganismes morts o morts. Gràcies a les propietats tinctorials dels bacteris, els microbiòlegs determinen la seva estructura. Aquesta tinció és la que s'utilitza més.
Gram-positius i Gram-negatius
Són aquestes característiques dels bacteris que es poden trobar a les instruccions de diversos medicaments. Aquest mètode d'estudi de les propietats tinctorials dels bacteris es basa en l'ús de colorant violeta de genciana i fixació de iode. Aquesta és la tècnica de Hans Christian Gram, un metge danès que la va proposar el 1884. Com a resultat d'aquesta tinció, els bacteris es divideixen en dos grups:
- Gram (+) - es torna blau(estafilococs i estreptococs).
- Gram (-) - taca de rosa a vermell (enterobacteris, salmonel·la, E. coli).
Els diferents resultats de la tinció es deuen a les diferents propietats tinctorials de les parets bacterianes. El mètode de tinció de Gram segueix sent el principal en el diagnòstic d'algunes mal alties infeccioses.
Altres tècniques de tinció
Caracteritzem alguns mètodes més utilitzats àmpliament en bacteriologia.
- Mètode Ziehl-Nelson: determina la resistència a l'àcid dels bacteris. Identifica els agents causants de la tuberculosi i la micobacteriosi.
- Tècnica Romanovsky-Giemsa: tenyeix els bacteris acidòfils (àcid acètic i làctic) de vermell i els basòfils (espiroquetes i protozous) de blau.
- Tècnica de Morozov: tenyeix els bacteris de color marró i fa visibles els seus flagels.
Es poden veure espores
La tinció de fuccina de Tsiel us permet veure les espores bacterianes. Tenint un color rosat després de la tinció, són clarament visibles sobre el fons de bacteris blaus. Aquest mètode també és una eina de bacteriologia i té una gran importància pràctica.
