En la determinació diferencial d'enterobacteris i alguns vibris, la reacció de Voges-Proskauer ocupa un lloc especial. La prova es basa en la capacitat dels bacteris de fermentar la glucosa per formar acetoïna.
L'essència del procés de recerca
En microbiologia, la reacció de Voges-Proskauer s'utilitza sovint per diferenciar dins la família d'enterobacteris Yersinia (inclosos els patògens de la pseudotuberculosi i l'enterocolitis), Escherichia coli i els aerobis que formen espores. El resultat es visualitza acolorint el medi quan s'afegeixen determinats reactius.
Aquesta prova pertany a la sèrie IMViC (abreviatura de Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - un grup de proves d'identificació que inclouen definicions diferencials:
- amb indol, basat en la descomposició del triptòfan en indol, utilitzat en presència d'un reactiu de Kovacs o Ehrlich;
- utilitzantmethylroth, o vermell de metil, que detecta un determinat pH com a resultat de la metabolització de la glucosa;
- Reaccions de Voges-Proskauer per a la detecció d'acetil-metilcarbinol;
- utilització de citrat amb canvi de color com a resultat de l'alcalinització del medi.
L'essència del procés és la visualització de la presència de bacteris diagnosticats per la interacció de l'acetoïna formada per aquests amb la potassa càustica en presència d'oxigen. L'acetil-metilcarbinol s'oxida a diacetil, que forma un compost vermell brillant o rosa. Augmenteu la sensibilitat de la prova introduint alfa-naftol abans d'afegir potassa càustica.
Configuració de prova
La formulació de la reacció de Voges-Proskauer implica el cultiu previ de microorganismes. Es sembra un cultiu pur al medi de diagnòstic diferencial de Clark, una variació del qual és el brou de Clark (sense afegir agar-agar). S'utilitza un mitjà ja preparat o es prepara de manera independent. Els ingredients inclouen:
- 5g de peptona;
- 5 g de glucosa;
- 5 g de fosfat de potassi dibàsic;
- 1L destil·lat.
Durant l'estudi, el cultiu s'inocula amb un bucle bacteriològic estèril en un medi líquid. Quantitat - 5 ml en un tub d'assaig més control. La incubació es porta a terme a una temperatura de 35-37 graus durant dos dies. A continuació, es realitza un estudi de la reacció de Voges-Proskauer per etapes:
- 2, 5 ml de cultiu de brou es transfereixen a un tub estèril.
- Afegiu sis gotes d'alfa-naftol (solució d'alcohol al 5%).
- Afegeix un 40%una solució de potassi càustic en una quantitat de 0,1 ml o dues gotes.
- L'agitació es realitza agitant suaument el tub d'assaig.
- Avalueu el resultat al cap de 15 minuts des de l'inici de l'experiment.
Un mètode de prova alternatiu és la incubació durant la nit, el temps de la qual es redueix a 18 hores o fins a un dia. A més d'aquest mètode, també s'utilitza una prova exprés: s'introdueix un cultiu en bucle en 2 ml del medi, s'incuba durant unes quatre hores, després s'afegeixen reactius en una quantitat igual de 2-3 gotes, es barregen i el el resultat s'avalua al cap de deu minuts.
El control és un dels agents causants de la pneumònia Klebsiella pneumoniae - soca atcc 13883.
Avaluació del resultat
Un cop transcorregut el temps necessari després d'afegir els reactius (de 5 a 15 minuts), s'ha d'observar un color vermell cirera amb una reacció positiva pronunciada, vermell i rosa, amb una reacció positiva feble. No es registra cap canvi com a resultat negatiu.
L'excés de potassa càustica en una solució pot donar una imitació d'una reacció positiva, tenint-se en un color coure. En aquest cas, s'ha de registrar la resposta negativa de la colònia provada. També apareix la tinció de coure en els casos en què la valoració es fa una hora després de la introducció dels reactius.
A l'hora d'avaluar el resultat, s'ha de tenir en compte que el cultiu prolongat dels microorganismes estudiats (més de tres dies) condueix a l'acidificació del medi, que pot comportar un resultat incorrecte de l'estudi. La reacció pot ser lleugerament positiva ofals negatiu.
Requisits per als reactius de prova
Els reactius de Voges-Proskauer han de complir requisits com ara la concentració correcta, l' alta puresa i l'estabilitat, que s'aconsegueix mitjançant un emmagatzematge adequat.
Els kits de prova llestos per utilitzar normalment contenen reactius per a 100 o més usos i es presenten en vials de plàstic o vidre tintat. La qualitat està regulada per la documentació corresponent.
